Druhy Proteus, patřící do čeledi Enterobacteriaceae, jsou obecně považovány za střevní komenzály a jsou nejčastější klinickou příčinou infekcí močových cest. Nicméně nedávná identifikace Proteus spp. jako potenciálních původců relapsu Crohnovy choroby po resekci střeva poskytuje podnět ke studiu jejich potenciální role jako střevních patogenů. Druhy Proteus mají mnoho faktorů virulence potenciálně relevantních pro gastrointestinální patogenitu, včetně motility; závazek; produkce ureázy, hemolyzinů a IgA proteináz; a schopnost získat rezistenci vůči antibiotikům. Gastrointestinální onemocnění spojená s Proteem zahrnují gastroenteritidu (spontánní a související s jídlem), nozokomiální infekce, apendicitidu, kolonizaci zařízení, jako jsou nazogastrické sondy, a Crohnovu chorobu. Obzvláště silná byla asociace druhů Proteus s Crohnovou chorobou. Druhy Proteus jsou komenzály lidského střeva s nízkým výskytem, které mají významný patogenní potenciál; je zapotřebí další vyšetřování.
lékař klinické laboratorní diagnostiky
Druhy Proteus jsou členy rodiny bakterií Enterobacteriaceae. Nejčastěji jsou klinicky rozpoznány jako příčina infekcí močových cest. Ačkoli Proteus spp. Obvykle jsou považovány za komenzály gastrointestinálního traktu (GIT), jejich četnost jako procento mikrobiální komunity je velmi nízká (±0,05 %). V důsledku toho mohl jejich objev v chorobných stavech pomocí profilování 16S a možná metagenomiky vést ke vzniku Proteus spp. nedetekovatelné kvůli prahům bioinformatického množství.
Nedávná identifikace Proteus spp. jako potenciálních patogenů u recidivující Crohnovy choroby po resekci střeva poskytuje podnět ke studiu jejich potenciální role jako enterických patogenů. Tento přehled si klade za cíl poskytnout přehled o rodu Proteus z hlediska jeho známých faktorů virulence a také shromáždit důkazy týkající se role Proteus spp. v patofyziologii gastrointestinálních onemocnění.
Charakteristika rodu Proteus.
Proteus spp. Gramnegativní bakterie patřící do čeledi Enterobacteriaceae jsou běžnými komenzály mikrobioty gastrointestinálního traktu. První izoláty byly popsány a charakterizovány Hauserem na konci 19. století. Rod v současné době tvoří Proteus mirabilis, P. vulgaris, P. penneri, P. hauseri, P. terrae a P. cibarius a také nepojmenované genomospecie 4, 5 a 6. U lidí jsou všichni současní zástupci tohoto rodu kromě P. cibarius a P. terrae byly izolovány z klinických vzorků. Lidské střevo je typicky kolonizováno různými kombinacemi P. vulgaris, P. mirabilis a P. penneri, ale ty tvoří méně než 0,05 % střevní mikroflóry zdravých jedinců. Zatímco Proteus spp. jsou široce uznáváni jako patobionti a střevo je rezervoárem pro tyto bakterie, studie tohoto rodu se zaměřily spíše na jejich roli v infekcích močových cest než na střevní projevy.
Mnoho nedávných studií střevního „mikrobiomu“ ve vztahu ke zdraví a nemoci ukázalo, že existují velké změny v relativních poměrech klíčových bakteriálních taxonů spojených s aktivním onemocněním, běžně označovaným jako „dysbióza“. Jedním z charakteristických znaků dysbiózy u zánětlivých střevních onemocnění (IBD) je nárůst populace kmene Proteobacteria, zejména Enterobacteriaceae. Ostatním rodům z čeledi Enterobacteriaceae, jako jsou Escherichia, Shigella, Salmonella a Klebsiella, byla v tomto ohledu věnována odpovídající pozornost, ale Proteus nebyl rozsáhle studován.
Druhy Proteus jsou krátké (1,5–2 μm), rovné tyčinky, které vykazují dimorfismus ve formách „plavání“ a „rojení“, jako několik dalších členů čeledi Enterobacteriaceae.
Proteus spp. v horní části gastrointestinálního traktu
Kolonizace horní části gastrointestinálního traktu, včetně jícnu a žaludku.
Bolest způsobená druhem Proteus u kojenců a starších osob je často spojena s orofaryngeálním instrumentáriem. U 13 kojenců s vyživovacími sondami bez gastrointestinálních příznaků byl Proteus izolován z krku u 8 % pacientů, ze žaludeční šťávy u 15 % pacientů a z duodena u 8 % pacientů. U starších pacientů s nazogastrickou vyživovací sondou (NGT) byly druhy Proteus izolovány z orofaryngu u 24 % pacientů a ze žaludeční tekutiny u 26 % pacientů. V jiné studii byla orofaryngeální kolonizace druhem Proteus přítomna u 13 % pacientů s perkutánní endoskopickou gastrostomií (PEG) a 21 % pacientů s NGT a kolonizace žaludku byla přítomna u 4 % a 23 % stejných pacientů. respektive
Asociace s hepatobiliárním onemocněním.
Časné kultivační studie pacientů podstupujících biliární operaci prokázaly příležitostnou izolaci druhů Proteus ze žlučových cest (13 % vzorků žluči). P. mirabilis byl také izolován ze žluči získané během endoskopické retrográdní cholangiopankreatikografie (ERCP) u 6 % kultivovaných vzorků.
V metagenomické analýze s použitím vícebodového pyrosekvenování byla rektosigmoidální slizniční komunita zdravých jedinců porovnána s komunitou pacientů s cirhózou. Pacienti s cirhózou měli zvýšený podíl druhů Proteus ve srovnání s kontrolami; relativní abundance u zdravých kontrol byla 0,0 % ve srovnání s 0,1 % u pacientů s cirhózou (P 0,00001). Je známo, že mikroby produkující ureázu, jako je Proteus spp. ve střevě, přispívají k patogenezi jaterní encefalopatie degradací močoviny na amoniak a kyselinu uhličitou.
V sérii pacientů podstupujících resekci jater byla u dvou pacientů zjištěna bakteriémie Proteus vulgaris au osmi pacientů polymikrobiální infekce. V hepatobiliárním traktu Proteus spp. jsou vzácnou příčinou infekce a jsou obvykle spojeny s chirurgickými zákroky, jako je ERCP nebo břišní chirurgie. Implantovatelná zařízení, jako jsou stenty, jsou také ohrožena kolonizací a tvorbou biofilmu.
Druhy Proteus jsou odolné, adaptabilní a potenciálně patogenní obyvatelé lidského gastrointestinálního traktu a jsou nedoceněnou příčinou gastrointestinálních onemocnění. Hostitel-mikrobiální a mikrobiálně-mikrobiální interakce u Proteus spp., stejně jako patogenita tohoto rodu, která může vyplývat z expanze populace v reakci na změny prostředí, se objevují jako důležité aspekty onemocnění spojených s tímto rodem. Možný příspěvek Proteus spp. střevním onemocněním a infekcím je věnována určitá pozornost. Studie virulence Proteus spp. v močovém traktu, pomocí bakteriologie ileálních kanálků a střevních segmentů ke zvětšení močového měchýře, naznačuje, že Proteus spp. Jejich potenciál jako gastrointestinálních patogenů by měl být prozkoumán podrobněji.
Existuje stále více důkazů, že druhy Proteus mohou hrát roli při zánětlivém onemocnění střev prostřednictvím přímého bakteriálního působení, které se zhoršuje únikem a narušením imunitního systému hostitele. Jako gramnegativní organismy jsou druhy Proteus přirozeně prozánětlivé prostřednictvím produkce lipopolysacharidů (LPS) a imunostimulačních proteinů flagellin. Mezi druhy Proteus a zánětlivým onemocněním střev, zejména Crohnovou chorobou, může existovat souvislost, a to především v důsledku populačního růstu a aktivace imunitního systému. Jejich nízká velikost populace nevylučuje potenciálně velký patogenní dopad.
Genetická charakterizace střevních izolátů ve srovnání s izoláty z močového traktu bude důležitá pro stanovení vlivu faktorů virulence na gastrointestinální patogenezi.
Výzkum střevního mikrobiomu jako ekosystému nám umožňuje nahlédnout do druhů Proteus, ale stále existují nezodpovězené otázky. Patří mezi ně získání potvrzení, že druhy Proteus se mohou rojit v lidském střevě a řešení účinků jednotlivých změn prostředí (např. operace, pH nebo koncentrace kyslíku) na populaci Proteus související se sliznicí.
Ještě užitečnější informace na našem kanálu Telegram
Abstrakt vědeckého článku o biologických vědách, autor vědecké práce – Dmitrij Arkadyevič Vasiliev, Natalya Aleksandrovna Feoktistova, Sergey Nikolaevich Zolotukhin
Článek prezentuje výsledky výzkumu izolace a studia biologických vlastností bakterií rodu Proteus. Bakteriologické studium patologického materiálu, výkalů a výplachů z chovů hospodářských zvířat a drůbeže, nepříznivých pro gastrointestinální onemocnění v oblasti Uljanovsk a Samara, umožnilo izolovat 48 izolátů, z nichž 16 kmenů bakterií bylo odlišeno jako bakterie rodu Proteus. Bylo zjištěno, že těchto 16 kultur mělo schopnost produkovat fenomén „rojení“ na médiu Endo a Gramovo barvení odhalilo v nátěrech přítomnost gramnegativních tyčinek se zaoblenými konci, které nevytvářely spory a tobolky, umístěné jednotlivě nebo v párech. . Hlavní testy pro identifikaci bakterií rodu Proteus jsou deaminace fenylalaninu, reakce na sirovodík, s methylrot, Voges-Proskauer, zkapalnění želatiny. Studie enzymatické aktivity ukázala, že ze 16 kmenů nefermentovaly laktózu, arabinózu, mannitol, nedekarboxylovaly lysin a arginin a nevyužívaly malonát. Byla zjištěna výrazná variabilita izolovaných kultur ve fermentaci maltózy, dekarboxylaci ornithinu a využití citrátu v Simonsově médiu. Kombinace studovaných tinktoriálních, kulturně-morfologických a biochemických charakteristik umožnila odlišit izolované kultury na kmeny Proteus vulgaris 9 a kmeny Proteus mirabilis 7 na základě schopnosti fermentovat maltózu a dekarboxylovat ornithin. Na základě charakteristických biologických vlastností vybraných na základě literárních zdrojů je navržen algoritmus pro diferenciaci bakterií rodu Proteus.
Podobná témata vědecké práce v biologických vědách, autorem vědecké práce je Dmitrij Arkadyevič Vasiliev, Natalya Aleksandrovna Feoktistova, Sergey Nikolaevich Zolotukhin
Izolace bakterií rodu Citrobacter
Biologické vlastnosti enterobakterií izolovaných ze zvířecích patologií
Izolace bakterií a bakteriofágů Yersinia enterocolitica
Studium biochemických a morfologických vlastností kmenů bakterií rodu Lactobacillus
Studium biologických vlastností bakteriofágů rodu Proteus
i Nemůžete najít, co potřebujete? Vyzkoušejte službu výběru literatury.
IZOLACE A STUDIE BIOLOGICKÝCH VLASTNOSTÍ BAKTERIÍ PROTEUS
Článek představuje výsledky studií izolace a studia biologických vlastností bakterií rodu Proteus. Bakteriologické studium patologického materiálu, exkrementů a likvidace hospodářských a drůbežích farem, které mají v oblasti Uljanovsk a Samara riziko gastrointestinálních onemocnění, umožnilo extrahovat 48 izolátů, 16 kmenů těchto bakterií bylo odlišeno jako bakterie rodu Proteus. Bylo zjištěno, že těchto 16 kultur bylo schopno vyvolat fenomén „rojení“ na Endově médiu a Gramovo barvení ukázalo přítomnost gramnegativních tyčinek se zaoblenými konci, které nevytvářely spory a tobolky, umístěné pouze a v párech. . Zastřešující testy pro identifikaci bakterií rodu Proteus jsou následující: deaminace fenylalaninu, reakce na sirovodík, s methylčervení, Foges-Proskauera, likvace želatiny. Studium enzymatické aktivity ukázalo, že ze 16 kmenů nebyly fermentovány laktóza, arabinóza, mannitol, lysin a arginin nebyly dekarboxylovány, malonát nebyl využit. Byla zjištěna výrazná variabilita izolovaných kultur na fermentaci maltózy, dekarboxylaci ornithinu, využití citrátu v Simonsově médiu. Kombinace studovaných tinktoriálních, kulturně-morfologických a biochemických vlastností umožnila odlišit izolované kultury na kmeny Proteus vulgaris-9 a kmeny Proteus mirabilis-7 na základě schopnosti fermentovat maltózu a dekarboxylovat ornithin. Je navržena sekvence pro diferenciaci bakterií rodu Proteus na základě specifických biologických vlastností vybraných v literárních zdrojích.
Akademická výzkumná práce na téma “Izolace a studium biologických vlastností bakterií rodu Proteus”
IZOLACE A STUDIE BIOLOGICKÝCH VLASTNOSTÍ BAKTERIÍ RODU PROTEUS
Dmitrij Arkaďjevič Vasiliev, doktor biologických věd, profesor, vedoucí katedry mikrobiologie, virologie, epizootologie a veterinární a sanitární expertizy
Feoktistova Natalya Aleksandrovna, kandidátka biologických věd, docentka katedry mikrobiologie, virologie, epizootologie a veterinární sanitární expertizy
Zolotukhin Sergey Nikolaevich, doktor biologických věd, profesor katedry mikrobiologie, virologie, epizootologie a veterinární a sanitární expertizy, Uljanovská státní zemědělská akademie
432017, Uljanovsk, Novy Venets Boulevard, 1; 8(8422)55-95-47 e-mail: feokna@yandex. ru
Klíčová slova: Proteus, biologické vlastnosti, kultury mikroorganismů, patologický materiál, diferenciace
Článek prezentuje výsledky výzkumu izolace a studia biologických vlastností bakterií rodu Proteus. Bakteriologické studium patologického materiálu, výkalů a výplachů z chovů hospodářských zvířat a drůbeže, nepříznivých pro gastrointestinální onemocnění v oblasti Uljanovsk a Samara, umožnilo izolovat 48 izolátů, z nichž 16 kmenů bakterií bylo odlišeno jako bakterie rodu Proteus. Bylo zjištěno, že těchto 16 kultur mělo schopnost produkovat fenomén „rojení“ na médiu Endo a Gramovo barvení odhalilo v nátěrech přítomnost gramnegativních tyčinek se zaoblenými konci, které nevytvářely spory a tobolky, umístěné jednotlivě nebo v párech. . Hlavní testy pro identifikaci bakterií rodu Proteus jsou deaminace fenyl-laninu, reakce na sirovodík, s methylrothem, Voges-Proskauer, zkapalnění želatiny. Studie enzymatické aktivity ukázala, že ze 16 kmenů nefermentovaly laktózu, arabinózu, mannitol, nedekarboxylovaly lysin a arginin a nevyužívaly malonát. Byla zjištěna výrazná variabilita izolovaných kultur ve fermentaci maltózy, dekarboxylaci ornithinu a využití citrátu v Simonsově médiu. Kombinace studovaných tinktoriálních, kulturně-morfologických a biochemických charakteristik umožnila odlišit izolované kultury na Proteus vulgaris – 9 kmenů a Proteus mirabilis – 7 kmenů na základě schopnosti fermentovat maltózu a dekarboxylovat ornitin. Na základě charakteristických biologických vlastností vybraných na základě literárních zdrojů je navržen algoritmus pro diferenciaci bakterií rodu Proteus.
Bakterie rodu Proteus patří dle literatury do skupiny saprofytických mikroorganismů gastrointestinálního traktu zvířat a drůbeže [1, 2]. Podíl bakterií rodu Proteus vůči mikroorganismům jiných rodů a čeledí v tenkém střevě mladých hospodářských zvířat a drůbeže na farmách nepříznivých pro gastrointestinální onemocnění je v průměru 23–48 % [35]. Bylo zjištěno, že rozvoj průjmu Proteus závisí na podmínkách krmení, zoohygienických parametrech chovaných zvířat a drůbeže a imunitním stavu. Bakterie rodu Proteus způsobují onemocnění mladých hospodářských zvířat a drůbeže, která jsou v imunosupresivním stavu a jsou nejvíce náchylná ke stresu. Infekce Proteus se navíc často vyvinou sekundárně k dysbióze nespecifické povahy (dyspepsie, gastroenteritida) a virové infekci (rotavirový průjem, korona, parvo, adenovirové a další infekce) [1, 6–8]. Propuknutí infekce Proteus
jsou zaznamenány především sporadicky v případech epizootií ve stádě, přidruženou roli sekundární infekce hrají bakterie rodu Proteus u smíšených (asociativních) infekčních lézí [9]. Je známo, že hlavní cestou přenosu původce této infekce je výživa. Mezi vnímavá zvířata patří především telata v prvních třech týdnech života a selata do 2 měsíců věku. Úmrtnost na tuto infekci se pohybuje v rozmezí 5–18 %, avšak ekonomické škody na onemocnění trávicího traktu spočívají ve snížení živé hmotnosti nemocných zvířat a snížení imunitního stavu v následném období života, což vede k ztráta růstu na 1 napájecí jednotku nebo 1 rubl investice [7, 10].
Mimořádně zajímavá z hlediska izolace virulentů je izolace bakterií rodu Proteus z mikrobioty patologického materiálu, výkalů a výplachů hospodářských a drůbežích prostor z chovů nepříznivých pro onemocnění trávicího traktu.
kmeny Proteus za účelem hledání specifických virulentních bakteriofágů, které lze použít ke konstrukci fágového biologického produktu pro diagnostiku, prevenci a léčbu dysbiózy způsobené Proteusem ve smíšených nebo monokulturách.
Účelem práce je izolovat bakterie rodu Proteus z patologického materiálu a předmětů hygienického dozoru chovů hospodářských zvířat a drůbeže z chovů nepříznivých pro onemocnění trávicího traktu a studovat jejich základní biologické vlastnosti pro možné využití výsledných kmenů jako indikátoru. bakteriální kultury při studiu biologických vlastností bakteriofágů Proteus .
1. izolovat bakterie rodu Proteus z patologického materiálu a objektů hygienické kontroly;
2. studovat tinktoriální, kulturní a biochemické vlastnosti izolovaných bakterií rodu Proteus;
3. vypracovat optimální schéma pro izolaci a bakteriologickou identifikaci bakterií rodu Proteus.
Předměty a metody výzkumu
Patologický materiál a výkaly telat, selat a drůbeže (kuřat a kachen) s klinickými příznaky průjmu, výkaly a výplachy z chovů hospodářských zvířat a drůbeže, nepříznivé pro gastrointestinální onemocnění v oblasti Uljanovsk a Samara.
Živný bujón TU 10-02-02-789-176-94 (LLC “BioKompas-S”, Ruská federace), živný agar pro kultivaci mikroorganismů suchý (GRM-agar) TU 9398-020-78095326-2006 (stát FBUN Výzkumné centrum pro PMB, Ruská federace); Micro-GRAM-NIsF sada činidel pro barvení mikroorganismů pomocí Gramovy metody TU 9398-002-39484474-2002 (JSC NIsF, RF); Hissovo médium s mannitolem (Státní výzkumné centrum FBUN pro lékařskou a biologickou medicínu, Ruská federace); Hissovo médium s glukózou (Státní výzkumné centrum pro lékařství a biologii FBUN, Ruská federace); Hissovo médium s arabinózou (Státní vědecké centrum primární medicíny FBUN, Ruská federace), Hissovo médium s maltózou (Státní vědecké centrum FBUN pro primordiální medicínu, Ruská federace); Hissovo médium se sacharózou (Státní výzkumné centrum pro lékařství a biologii FBUN, Ruská federace); „Živné médium s nízkým obsahem sodíku pro diferenciaci enterobakterií, suché“ (Biotechnovatsiya LLC, Ruská federace), živná želatina (HiMedia, Indie), médium Endo, médium Ploskirev, bismut sulfitový agar, médium Clark (LLC „BioKompas-S“ , Ruská federace), 0,6% alkoholový roztok a-naftolu, 40% KOH, Kliglerovo médium (HiMedia, Indie), Simmons citrátový agar (FSUE NPO Microgen, Ruská federace), Müllerovo médium s L-lysinem, L-argininem, L-ornitinem (HiMedia, Indie); Fenylalaninový agar (HiMedia, Indie), Urea Agar Base (Christensen) Ureasový agarový základ (podle Christensena) (HiMedia, Indie), Urea 40% Urea
40% roztok (HiMedia, Indie); činidla: a — naftol, hydroxid draselný; 10% roztok chloridu železitého.
Bakteriologické identifikační schéma bylo provedeno námi na základě více než desetiletých zkušeností s prací s mikroorganismy tohoto rodu a bylo provedeno pomocí známých bakteriologických testů [10-17]. Pro enzymatickou identifikaci Proteus vulgaris a Proteus mirabilis byla použita klasická metoda inokulace kultury do zkumavek obsahujících substráty a indikátory.
První den studia
Ze vzorků patologického materiálu a objektů sanitární kontroly byly provedeny proužkové kultury na médiu Endo, médiu Ploskirev a agaru se siřičitanem bismutitý. Plodiny byly kultivovány v termostatu po dobu 24 hodin při 37 °C.
Pěstované v miskách na médiu Endo: bezbarvé nebo našedlé kolonie s růžovým nádechem, s plazivým růstem charakteristickým pro Proteus (obr. 1); na Ploskirevově agaru byly průsvitné kolonie s perleťovým odstínem v zóně růstu kolonie, médium se stalo alkalickým a zežloutlo; na bismutovo-siřičitanovém agaru (po 48 hodinách inkubace) – tmavě hnědé kolonie, přenesené do masovo-peptonového bujónu (4-6 kolonií na misku). Pro další výzkum jsme vybrali 48 kultur mikroorganismů, které byly inkubovány při 37 0C po dobu 18 hodin (do výrazného zakalení média) za podmínek termostatu.
Primární kultury bujónu izolované po subkultivaci kolonií z výše uvedených médií byly mikroskopovány (barvení podle Grama) a pokud nátěry obsahovaly gramnegativní tyčinky se zaoblenými konci, které nevytvářely spory a pouzdra, umístěné jednotlivě nebo v párech, byly podrobeny další vyšetření za účelem generické a druhové identifikace a také stanovení jejich patogenity. Bylo identifikováno 24 kmenů kultur majících výše uvedené barvicí vlastnosti. Další studie jsme proto provedli pouze na těchto kmenech bakterií. Izolované kultury byly vysety na 0,3% maso-peptonový agar pro skladování při teplotě 2-4 °C. Kultury byly vytvořeny na masovo-peptonovém bujónu (kultivační parametry: teplota 0 °C a doba – 37 hodin).
Zjistili jsme, že všech 24 kultur vykazovalo známky motility při kultivaci na 0,3% maso-peptonovém agaru. Dále druh
Rýže. 1 — Růst bakterií rodu Proteus na médiu Endo (doba kultivace 24 hodin při teplotě 37 0C)
Identitu izolovaných mikroorganismů jsme stanovili na základě stanovení biochemických vlastností. Analýza odborné literatury nám umožnila vytvořit algoritmus pro primární diferenciaci bakterií rodu Proteus. Charakteristickým rysem Proteas od ostatních zástupců čeledi Enterobacteriaceae je schopnost oxidativně deaminat aminokyselinu fenylalanin na ketokyseliny.
Prvním rozdílovým znakem, který nám umožnil přiřadit bakteriální kmeny, které jsme izolovali, k rodu Proteus, byla schopnost kultur deaminovat fenylalanin na specializovaném komerčním médiu (byl použit Phenylalanine Agar). Je známo, že Protey jsou schopny deaminovat fenylalanin za vzniku kyseliny fenylpyrohroznové, která má velký význam pro diferenciaci enterobakterií v kmeni „Proteus, Morganella, Providencia“ [6,11]. Kvasnicový extrakt, který je součástí média, poskytuje mikroorganismům živiny nezbytné pro život. DL-fenylalanin je fermentační substrát, ze kterého se na vzduchu tvoří kyselina fenylpyrohroznová. Byly naočkovány na povrch šikmého agaru a kultivovány při teplotě 37 °C po dobu 0 hodin. Pokud je reakce pozitivní, po aplikaci několika kapek 24% roztoku chloridu železitého na mikrobiální růst se rozvine zelené zbarvení. V případě negativní reakce se barva média a růst nemění. Výsledek se bere v úvahu do 10 minut po aplikaci činidla, protože zelená barva rychle vybledne.
Druhý diferenciální test, jehož pozitivní výsledek umožní, aby izolované kmeny bakterií byly klasifikovány jako kmeny patřící do rodu Proteus, je
jedná se o pozitivní reakci s methylrothem a negativní reakci s Voges-Proskauerem. Tento test je založen na detekci acetoinu (acetyl-methyl-karbinolu), meziproduktu při přeměně kyseliny pyrohroznové (vzniká při rozkladu glukózy) po butylenglykolové dráze. V přítomnosti kyslíku a KOH se acetoin oxiduje na diacetyl za vzniku červené sloučeniny. Citlivost testu se zvyšuje přidáním a-naftolu před přidáním KOH. Pro stanovení těchto produktů byly studované kultury mikroorganismů naočkovány na Clarkovo médium a inkubovány při teplotě 370C po dobu 48 hodin.
Třetím testem, který sloužil jako základ pro přiřazení izolovaných kmenů k rodu Proteus, byla schopnost tvořit sirovodík. Použili jsme Kliglerovo médium, kde nám indikátor fenolové červeně umožňuje odlišit gramnegativní bakterie podle jejich schopnosti fermentovat glukózu a laktózu a produkovat sirovodík. Thiosíran sodný a síran železnatý, které jsou součástí média, podporují tvorbu sirovodíku. Fenolová červeň je indikátor pH. Fermentace glukózy je označena žlutým sloupcem, laktóza žlutým zkosením a tvorba sirovodíku zčernáním sloupce. Plodiny byly inkubovány při 370 °C po dobu 18 hodin.
Čtvrtý diferenciální test měl stanovit zkapalňovací schopnost 12% želatiny. Má hutnou konzistenci při teplotách pod 20°C a tekutou při 35°C a vyšších. Želatina zkapalňuje při 28 °C, takže kultury byly inkubovány při 370 °C po dobu 48 hodin, ale před zaznamenáním výsledků je bude nutné uchovávat v chladničce asi 2 hodiny.
Poslední fází identifikace bylo stanovení enzymatické aktivity izolovaných kultur. K tomu jsme použili klasickou metodu naočkování kultury do zkumavek obsahujících substráty a indikátory.
Bylo zjištěno, že pouze 16 z 24 námi izolovaných kultur vykazovalo schopnost deaminace fenylalaninu (tabulka 1).
Při určování schopnosti emitovat sirovodík u 24 kultur, které jsme studovali, bylo zjištěno, že ve zkumavkách se 16 kulturami sloupec zčernal a sklon zčervenal, což ukazuje na absenci schopnosti těchto kmenů fermentovat laktózu a schopnost emitovat sirovodík (tabulka 1).
Studie enzymatické aktivity izolovaných kultur ukázala, že 16 kmenů nefermentovalo arabinózu a nemělo dekar-
Biochemické vlastnosti izolovaných bakterií, které jsme přiřadili rodu Proteus
Biochemický znak 1 3 12 13 16 18 21 24 25 28 32 33 36 37 38 40